Análise do gene PSAP como possível via para a Doença de Gaucher

Análise do gene PSAP como possível via para a Doença de Gaucher

Author Gomes, Caio Perez Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Pesquero, Joao Bosco Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Ciências Biológicas (Biologia Molecular)
Abstract Objective: To evaluate the activity of β-glucosylceramidase in filter paper quantifying glucosylceramide and standardize the molecular analysis of PSAP gene, to find cases of Gaucher disease due to PSAP gene mutations in patients with suspected clinical disease and molecular diagnosis by Sanger sequencing not confirmed for Gaucher disease. Methods: We selected 50 DBS samples of patients with suspected Gaucher disease previously stored for the study group. The genetic DNA of these samples were extracted and subjected to molecular analysis, we performed the sequencing of exons and their flanking regions of PSAP gene by the Sanger technique. Analysis of the activity of the enzyme β-glycosylceramidase was performed by quantifying glycosylceramide and ceramide by mass spectrometry. Enzymatic activities were performed in 14 individuals from the control group, 14 PSAP and 17 from the Gaucher group. Results: The molecular analysis of the PSAP gene was standardized, we found 32 variants, the variants was analyzed in silico, 12 of them were important for the clinical condition of patients. The evaluation of β- glycosylceramidase activity by standardizing glycosylceramide detection showed a 30% decreased activity in the PSAP gene variant group and 33% in the Gaucher group. Interestingly, despite the lower β-glycosylceramidase activity in Gaucher patients, the quantification of ceramide formed in the glycosylceramide reaction was significantly higher in these patients. Similarly, incubation of exogenous ceramide with blood samples in the three groups demonstrated lower ceramidase activity in Gaucher patients. Conclusion: In the present work we standardized a new mass spectrometry technique for the differential diagnosis of Gaucher disease due to PSAP gene mutations. In addition, our results also demonstrated a decrease in ceramidase activity in Gaucher patients. Taken together, these findings should assist in the faster and more accurate diagnosis of Gaucher disease.

Objetivo: Avaliar a atividade da β-glicosilceramidase em papel de filtro por meio da quantificação da glicosilceramida e padronizar a análise molecular do gene PSAP, com o intuito de encontrar casos da doença de Gaucher que sejam ocasionados por mutações no gene PSAP em pacientes com suspeita clínica e diagnóstico molecular não confirmado para a doença de Gaucher pelo sequenciamento do gene GBA. Métodos: Foram selecionadas 50 amostras de DBS de pacientes com suspeita de Doença de Gaucher previamente armazenadas que compuseram o grupo de estudo. O DNA genômico dessas amostras foi extraído e submetido à analise molecular por sequenciamento dos exons e regiões flanqueadoras do gene PSAP, pela técnica de Sanger. A análise da atividade da enzima β-glicosilceramidase foi realizada por meio da quantificação da glicosilceramida e ceramida por espectrometria de massas. As atividades enzimáticas foram realizadas em 14 indivíduos do grupo controle, 14 PSAP e 17 do grupo Gaucher. Resultados: Foi padronizada a análise molecular do gene PSAP, sendo encontradas 32 variantes, as quais foram analisadas in silico, sendo 12 delas consideradas importantes para o quadro clínico dos pacientes. A avaliação da atividade da β-glicosilceramidase por meio da padronização da detecção da glicosilceramida mostrou uma diminuição de atividade de 30% grupo de pacientes com variantes no gene PSAP e de 33% no grupo Gaucher. Interessantemente, apesar da menor atividade β-glicosilceramidase nos pacientes com Gaucher, a quantificação da ceramida formada na reação da glicosilceramida foi significantemente maior nesses pacientes. Da mesma forma, a incubação de ceramida exógena com as amostras de sangue nos três grupos demonstrou uma menor atividade ceramidase nos pacientes de Gaucher. Conclusão: No presente trabalho padronizamos uma nova técnica por espectrometria de massas para o diagnóstico diferencial da doença de Gaucher devido a mutações no gene PSAP. Além disso, nossos resultados demonstraram também uma diminuição na atividade ceramidase nos pacientes de Gaucher. Em conjunto, esses achados devem auxiliar no diagnóstico mais rápido e preciso da doença de Gaucher.
Keywords Gaucher
Erro Inato De Metabolismo
Doenças De Acúmulo Lisossomal
Esspctometria De Massas
Sequenciamento Genético
Language Portuguese
Date 2019-12-18
Research area Estrutura, Atividades E Sintese De Peptideos E Proteinas
Knowledge area Biofisica
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 68 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8174756
Access rights Closed access
Type Thesis
URI https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59727

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