Duguetia lanceolata St. -Hil (Annonaceae): composição química da fração alcaloídica e do óssencial e avaliação da atividade anti-Trypanosoma cruzi e antimicrobiana

Duguetia lanceolata St. -Hil (Annonaceae): composição química da fração alcaloídica e do óssencial e avaliação da atividade anti-Trypanosoma cruzi e antimicrobiana

Author Dantas, Erick Pereira Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Sartorelli, Patricia Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Biologia Química
Abstract The Annonaceae family is composed by 135 genus and 2500 species; 34 of these can be found in South America. Among these, 29 take place in Brazil, including the Duguetia genus with 50 of the 80 classified species. The specie selected for this study was Duguetia lanceolata, known popularly as "pindaiva" or "ateira-da-mata", occurs in the Brazil, in the Dense Ombrophilous Forest, Seasonal Semideciduos Forest, Riparian Forest, Padulosa Forest and Cerrado. The present work aims to evaluate the antiparasitic (Trypanossoma cruzi) and antifungal potential (Candida albicans, Cryptococcus neoformans and Saccharomyces cerevisiae) of alkaloids and other fixed and volatile metabolites isolated from the leaves of D. lanceolata. The crude extract was subjected to acid-base extraction yielding the alkaloid extract (EA). EA was subjected to column chromatography using flash silica yielding fifteen fractions. Fractions EA9 and EA10 were selected after confirmation of alkaloids in these fractions by Dragendorff. EA9 and EA10 were subjected to other chromatographic procedures as flash silica chromatography, Sephadex LH-20, HPLC and HPLC-MS. After these steps, it was possible to isolate 2 fixed compounds, glaucine (aporphic alkaloid) and litholide (lactone) and to separate and identify other 13 fixed compounds, 3 aporphinal alkaloids (glaucine, 7-hydroxydehydroglaucine, dehydroglacaine, norglaucine and boldine), 3 oxoaporfine alkaloids (liriodenine, oxoglaucine and lanuginosine), 2 pyrrolizidine alkaloids (ipanguline B2 and isoipanguline B2), 2 sesquiterpenes (capsidiol and β-caryophyllene), and 2 aromatic compounds (1,3,5-trimethoxybezene and one unknown). All these compounds were characterized and identified by uni- and bidimensional spectroscopic techniques, mass spectrometry and compared to the literature. Glaucine and loliolide were evaluated for antiparasitic potential and cytotoxicity. For the trypomastigotes the two substances presented similar activity > 150.0 μM. For the amastigotes the lololide presented activity of > 30.0 μM that is greater than that of the glaucina of 80.7 μM. As for cytotoxicity, the two were not considered cytotoxic due to values > 200.0 μM. The essential oil of the leaves of Duguetia lanceolata was analyzed for its chemical composition by CG-FID and CG-MS, as result 13 compounds were identified corresponding to 83.73% of the total oil composition with bisabolene (24.87%), germacrene-D (18 , 60%) and gurjuren α (12.08%) as major compounds. For the isolation of the major compounds, the essential oil was subjected to chromatographic procedure by silica normal phase column soaked with AgNO3, obtaining 12 fractions. The DLO 3 fraction was subjected to preparative thin layer chromatography, affording 5 subfractions. After analysis of the NMR ¹H and ¹³C spectrums of the fraction DLO3-4 and DLO-5. They are shown to be constituted by the epoxy-caryophyllene and β-bisabolene, respectively. The potential antimicrobial activity of the essential oil, fractions and subfractions were evaluated against Candida albicans, Cryptococcus neoformans and Saccharomyces cerevisiae strains. Crude oil showed antimycotic activity against Cryptococcus neoformans and Saccharomyces cerevisiae. The DLO 3 fraction demonstrated antifungal activity against Candida albicans and Cryptococcus neoformans. Although the subfractions DLO3-4 (ephoxi-caryophyllene) and DLO3-5 (β-bisabolene) have not demonstrated antimicrobial activity, in combination these subfractions showed antifungal activity against Candida albicans and Cryptococcus neoformans, thus suggesting potential synergism between the compounds. Keywords: Duguetia lanceolata, alkaloids, anti-Trypanosoma activity, antimicrobial activity, essential oil. Keyword: Duguetia lanceolata, alkaloids, anti-Trypanosoma activity, antimicrobial activity, essential oil.

A família Annonaceae é composta por 135 gêneros e 2500 espécies; 34 gêneros podem ser encontrados na América do Sul. Dentre estes, 29 podem ser encontrados no Brasil, incluindo o gênero Duguetia com 50 das 80 espécies catalogadas. A espécie estudada, Duguetia lanceolata, conhecida popularmente como “pindaíva” ou “ateira-da-mata”, ocorre no Brasil na Floresta Ombrófila Densa, Floresta Estacional Semidecidual, Mata Ciliar, Mata Paludosa e Cerrado. O presente trabalho teve o intuito de avaliar o potencial antiparasitário (Trypanossoma cruzi) e antifúngico (Candida albicans, Cryptococcus neoformans e Saccharomyces cerevisiae) de alcaloides e demais metabólitos fixos e voláteis isolados das folhas de D. lanceolata. O extrato bruto foi submetido a extração ácido-base produzindo o extrato alcaloídico (EA). O EA foi submetido a cromatografia de coluna utilizando sílica “flash” produzindo quinze frações. As frações Então, EA9 e EA10 foram selecionadas após confirmação de alcaloides nestas frações pelo revelador Dragendorff. EA9 e EA10 foram submetidas a outros procedimentos cromatográficos como cromatografia de sílica “flash”, Sephadex LH-20, CLAE e CLAE-EMAR. Após estas etapas foi possível isolar 2 compostos fixos, glaucina (alcaloide aporfínico) e loliolida (lactona) e separar e identificar outros 13 compostos fixos, 3 alcaloides aporfínicos (7-hidroxideidroglaucina, deidroglaucina, norglaucina e boldina), 3 alcaloides oxoaporfínicos (liriodenina, oxoglaucina e lanuginosina), 2 alcaloides pirrolizidínicos (ipangulina B2 e isoipangulina B2), 2 sesquiterpenos (capsidiol e β-cariofileno) e 2 compostos aromáticos (1,3,5-trimetoxibezeno e um não identificado). Todos estes compostos foram caracterizados e identificados por técnicas espectroscópicas uni- e bidimensionais, espectrometria de massas e comparados com a literatura. As susbtâncias glaucina e loliolida foram avaliadas quanto ao potencial antiparasitário e citotoxidade. Para os tripomastigotas as duas substâncias apresentaram atividade similiar > 150,0 µM. Para os amastigotas a loliolida apresentou atividade de > 30,0 µM que é maior que a da glaucina de 80,7 µM. Quanto a citotoxidade as duas não foram consideradas citotóxicas devido aos valores de > 200,0 µM. O óleo essencial das folhas de Duguetia lanceolata foi analisado quanto a composição química por CG-FID e CG-EM, sendo que 13 compostos foram identificados correspondendo a 83,73% da composição total do óleo com bisaboleno (24,87%), germacreno-D (18,60%) e gurjureno α (12,08%) como compostos majoritários. Para o isolamento dos compostos majoritários, o óleo essencial foi fracionado por cromatografia de coluna de sílica gel impregnada com AgNO3 obtendo-se 12 frações. A fração DLO 3 foi refracionada por CCDP produzindo 5 subfrações. Após análise dos espectros de RMN ¹H e ¹³C as frações DLO3-4 e DLO-5 mostraram-se constituídas pelos compostos epóxi-cariofileno e β-bisaboleno, respectivamente. O óleo essencial, frações e subfrações foram avaliadas quanto ao potencial antimicrobiano frente às linhagens de Candida albicans, Cryptococcus neoformans e Saccharomyces cerevisiae. O óleo bruto apresentou atividade antimicótica contra Cryptococcus neoformans e Saccharomyces cerevisiae. A fração DLO 3 demonstrou atividade antifúngica frente Candida albicans e Cryptococcus neoformans. Embora, as subfrações DLO3-4 (óxido de cariofileno) e DLO3-5 (β-bisaboleno) não tenham demonstrado atividade antifúngica separadas, em associação estes compostos apresentaram atividade antifúngica frente às linhagens Candida albicans e Cryptococcus neoformans, sendo assim sugerido potencial sinergismo entre os compostos.
Keywords Duguetia lanceolata
Alkaloids
Anti-trypanosoma activity
Antimicrobial activity
Essential oil
Duguetia lanceolata
Alcaloides
Atividade anti-tripanossoma
Atividade antifúngica
Óleo essencial
Language Portuguese
Sponsor Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Date 2018-04-03
Research area Biologia Química de Produtos Naturais e Sintéticos
Knowledge area Biologia Química
Publisher Universidade Federal de São Paulo
Extent 161 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7431876
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/52847

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