Viabilidade E Morte Celular Em Queimaduras In Vitro

Viabilidade E Morte Celular Em Queimaduras In Vitro

Alternative title Viability And Cell Death In In Vitro Burns
Author Fernandes, Ana Carolina Morais Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Ferreira, Lydia Masako Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Cirurgia Translacional
Abstract Introduction: Burns are responsible for pathophysiological, cellular and molecular changes and represent a severe form of trauma. There are few in vitro studies that allow the analysis of viability and cell death in thermal burns. Objective: To develop an experimental in vitro burn model capable of evaluating the activity of skin cells such as NIH-3T3 fibroblast line cells under thermal stress conditions for specific temperature values. Characterizing the cellular morphology and the process of cell death by necrosis and / or apoptosis associated with thermal burn, impossible to be evaluated for skin cells in vivo. Methods: 1) NIH-3T3 fibroblast line cells were used, which were subjected to thermal burn for 30s at specified temperatures; 2) The effects of thermal injury on cell viability were determined by: MTT assay, flow cytometry and immunohistochemistry; 3) statistical analysis was performed by the ANOVA variance test, for p <0.05, considering the mean and standard error of quadriplicates, n=4. Results: the MTT assay determined two graphical curves (two phases) with an inflection point for the delta temperature of 15 ° C; flow cytometric analysis indicated that with the increase of the delta temperature there was progressively increase in apoptosis followed by progressive increase in necrosis; the immunohistochemistry evidenced that with the increase in temperature there was a decrease in number of cells and number of mitosis, changes in membrane structure and cytoskeleton (formation of vesicles), with pycnotic and irregular nuclei. Conclusion: With the increase of thermal injury temperature there were significant changes in cellular activity and viability; drastic changes in morphology, with cellular lysis and progressive increase of apoptosis and necrosis of NIH 3T3 cells.

Queimaduras são responsáveis por alterações fisiopatológicas, celulares e moleculares e representam formas graves de trauma. Poucos são os estudos in vitro que possibilitem a análise da viabilidade e morte celular em queimaduras térmicas. Métodos: 1) Foram utilizadas células de linhagem de fibroblastos NIH-3T3, que foram submetidas a queimadura térmica por 30s a temperaturas especificadas; 2) Os efeitos da lesão térmica sobre a viabilidade celular foram determinados por ensaio MTT, citometria de fluxo e imunohistoquímica; 3) a análise estatística foi realizada pelo teste de variância ANOVA, para p<0.05, considerando a média e erro padrão de quadriplicatas, n=4. Resultados: o ensaio MTT determinou duas curvas gráficas (duas fases) com um ponto de inflexão para a temperatura delta de 15ºC. A análise por Citometria de Fluxo indicou que com o aumento do delta de temperatura houve progressivamente aumento de apoptose seguido pelo aumento progressivo de necrose. A Imunohistoquímica evidenciou que com o aumento da temperatura houve diminuição de número de células e do número de mitoses, mudanças na estrutura da membrana e citoesqueleto (formação de vesículas), com núcleos picnóticos e irregulares. Conclusão: Com o aumento da temperatura de lesão térmica houveram mudanças significativas na atividade celular e viabilidade (mudanças drásticas na morfologia, com lise celular e aumento progressivo de apoptose e necrose das células NIH 3T3).
Keywords Queimaduras
Linhagem Celular
Células Nih 3t3
Fibroblastos
Morte Celular
Language Portuguese
Date 2018-03-30
Research area Estresse Oxidativo E Modelos Experimentais Em Transplantes
Knowledge area Ciências Da Saúde
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 60 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=6371073
Access rights Open access Open Access
Type Dissertation
URI https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/52530

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Name: Dissertação_Ana Carolina Morais Fernandes.pdf
Size: 706.6Kb
Format: PDF
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