Comparação entre líquido amniótico e soro autólogo humanos para tratamento de olho seco induzido em modelo animal

Comparação entre líquido amniótico e soro autólogo humanos para tratamento de olho seco induzido em modelo animal

Author Quinto, Guilherme Goulart Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Campos, Mauro Silveira de Queiroz Campos Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Oftalmologia e Ciências Visuais
Abstract Purpose: To compare the effects of topical therapy, including HAF, HS, and preservative-free artificial tears, on the ocular surface in a previously established induced mouse model of KCS (keratoconjuntivitis sicca). Methods: Thirty C57BL/6 mice were randomized into 3 experimental groups of 10 animals each. All mice received a transconjunctival injection of botulinum toxin B (BTX-B) solution into the lacrimal gland to induce dry eye. Three days after intralacrimal gland injection, each group received treatment with topical 100% HAF, 20% HS, or preservative-free artificial tears (control). Each treatment was applied 4 times daily for a 4-week trial period. To monitor the progression of dry eye, tear production, ocular surface staining, and spontaneous blink rate were evaluated in all mice at 6 time points during the 4-week period. Goblet cell density was assessed in stained histological sections. Apoptotic keratocytes were evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling test assay (TUNEL test). Results: At week 1, the HAF and HS groups were significantly different compared with the control group (P < 0.001 and P = 0.003, respectively). However, there was no significant difference between the HAF and HS groups (P = 0.11). At week 2, both the HAF and the HS groups achieved levels higher than their baseline values, which continued until week 4; however, differences between the 2 groups were not statistically significant at any time point. At day 3, the fluorescein staining became more noticeable but with no difference between groups (P = 0.756). At week 2, HAF significantly improved the staining score and had a statistically significant difference compared with the HS (P = 0.043) and control (P = 0.007) groups. The HS group demonstrated a statistically significant difference when compared with the control group only at week 4 (P = 0.047). At week 4, there was no difference between the HAF and HS groups (P = 0.693); however, the HAF group demonstrated a lower score. No significant differences in the spontaneous blink rate and completeness occurred between groups at any time point. Regarding goblet cells density, in the inferior conjunctiva, there was a statistically significant difference when the HAF and HS groups were compared with the control (P < 0.001), but no significant difference was observed between the HAF and HS groups (P = 0.67). In the superior conjunctiva, the HAF and HS groups were significantly different from the control (P = 0.019); however, no difference was seen between the HAF and HS groups (P = 1.00). After 4 weeks of treatment, the mice were killed, and the TUNEL assay detected DNA fragmentation on the transition area between the superficial and the deep stroma. The amount of TUNEL-positive cells was not significantly different when the treatment groups were compared with the control. Conclusion: The results of this study suggest the potential usefulness of topical biologic fluids for treating KCS. HAF was superior to HS and the control treatment for improving corneal surface staining within 2 weeks of therapy in this induced mouse model of KCS. Both HAF and HS increased the goblet cell density compared with the control treatment. Further studies are needed to validate the efficacy of these treatments and to ascertain whether the findings from this study can translate to a clinical benefit for patients with ocular surface epithelial disorders associated with dry eye.

Objetivos: Comparar os efeitos da terapia tópica, incluindo líquido amniótico humano (LAH), soro autólogo humano (SAH) e lágrima artificial sem conservantes, em um modelo estabelecido de ceratoconjuntivite sicca (CCS) em camundongos. Métodos: Trinta camundongos C57BL/6 foram randomizados aleatoriamente em três grupos experimentais com 10 animais em cada grupo. Todos os animais receberam uma injeção transconjuntival na glândula lacrimal de solução de toxina botulínica B (BTX-B) para induzir o olho seco. Três dias após a injeção na glândula lacrimal, cada grupo recebeu tratamento com LAH 100%, SAH diluído a 20%, ou lágrima artificial sem conservantes (controle). Cada tratamento foi aplicado quatro vezes ao dia durante quatro semanas. Para monitorar a progressão do olho seco, a produção lacrimal, a coloração da superfície ocular, e taxa de piscar espontânea foram avaliados em todos os camundongos em seis momentos durante o período de quatro semanas de experimento. A densidade de células caliciformes foi avaliada em cortes histológicos. Ceratócitos em apoptose foram avaliados pelo teste de ensaio terminal deoxynucleotidyl transferase?mediated dUTP nick-end labeling (teste de TUNEL). Resultados: Significativa diminuição na produção lacrimal foi observada três dias após a injeção de BTX-B em todos os grupos. Na semana 1, os grupos LAH e SAH foram significativamente diferentes em comparação com o grupo controle (P <0,001 e P = 0,003, respectivamente). Na semana 2, ambos grupos LAH e SAH atingiram níveis mais elevados do que seus valores iniciais, os quais continuaram até a semana 4; entretanto, diferença entre os dois grupos não foi estatisticamente significativa em nenhum momento avaliado. A impregnação corneana por fluoresceína se tornou mais visível no dia 3. O grupo LAH teve diminuição significativa em sua graduação de impregnação por fluoresceína quando comparado aos grupos SAH (P = 0,043) e controle (P = 0,007) na semana 2. O grupo SAH demonstrou uma diferença estatisticamente significativa quando comparado ao grupo controle somente na semana 4 (P = 0,047). Não houve diferença entre os grupos LAH e SAH (P = 0,693); entretanto o grupo LAH apresentou graduação menor. Não houve diferença significativa de taxa de piscar espontânea entre os grupos em todos os momentos avaliados. Em relação à densidade de células caliciformes, tanto conjuntiva inferior quanto superior, houve diferença significativa entre os grupos LAH e SAH quando comparados ao controle (P < 0,001), mas nenhuma diferença importante foi observada entre os grupos LAH e SAH (P = 0,67). Ao final do experimento, nenhuma diferença foi evidenciada entre os grupos no número de células positivas apoptóticas através do teste de TUNEL. Conclusões: Os resultados deste estudo sugerem o potencial sucesso dos líquidos biológicos tópicos para o tratamento de CCS. LAH foi superior ao SAH e o grupo controle ao melhorar a superfície ocular dentro de duas semanas de tratamento neste modelo animal de CCS. Ambos LAH e SAH aumentaram a densidade de células caliciformes quando comparados ao grupo controle. Estudos complementares são necessários para confirmar a eficácia destes tratamentos e avaliar se estes resultados podem gerar benefícios clínicos em pacientes com alterações da superfície ocular associada ao olho seco.
Keywords síndromes do olho seco
líquido amniótico
soro
lágrimas
terapêutica
camundongos
Language Portuguese
Date 2013-06-26
Published in QUINTO, Guilherme Goulart. Comparação entre líquido amniótico e soro autólogo humanos para tratamento de olho seco induzido em modelo animal. 2013. 76 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2013.
Research area Medicina
Knowledge area Ciências da saúde
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 76 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=133738
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48927

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