Expressão e atividade de proteases durante a diferenciação de queratinócitos humanos

Expressão e atividade de proteases durante a diferenciação de queratinócitos humanos

Author Branco, Priscila Praxedes Garcia Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Araujo, Mariana da Silva Araujo Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Ciências Biológicas (Biologia Molecular)
Abstract Na pele normal, os queratinócitos migram do estrato basal para os estratos suprabasais e superficiais da epiderme, seguindo um complexo processo de diferenciação regulado por diversos mecanismos, onde enzimas desempenham um papel crucial. Estudamos a expressão de proteases e suas atividades em queratinócitos da linhagem HaCaT desde um estágio proliferativo até os diferenciados. As células foram cultivadas em meios contendo diferentes concentrações de Ca2+, sem ou com soro fetal bovino (SFB) durante treze dias. As células cultivadas em DMEM + SFB atingiram a diferenciação terminal no tempo estudado. A expressão de enzimas foi analisada por PCR em tempo real e atividade amidolítica foi medida com diferentes substratos FRET e caracterizada por inibidores específicos sintéticos. A expressão de calicreína (hK) 7 e hK5 foi detectada em todo o tempo e as suas atividades foram maiores no dia 9, sobrepondo-se à expressão de citoqueratina 10 e involucrina – um marcador do estrato granuloso. A expressão de catepsina B foi mais pronunciada no dia 6 e a sua atividade foi detectada em todo o curso do processo de diferenciação, indicando que a expressão da enzima ocorre em todas as camadas da epiderme. A maior expressão de catepsina D foi no dia 13 e sua atividade tornou-se relevante a partir do dia 3. Os nossos resultados mostram que a atividade enzimática e o perfil de expressão, nos dias estudados, estão correlacionados com eventos que participam na diferenciação da epiderme humana. Neste contexto, o presente sistema de cultura de células simplificado pode ser utilizado como uma ferramenta eficiente para o estudo da pele humana.
Keywords queratinócitos
células hacat
cálcio
diferenciação celular
proliferação celular
Language Portuguese
Date 2013-04-24
Published in BRANCO, Priscila Praxedes Garcia. Expressão e atividade de proteases durante a diferenciação de queratinócitos humanos. 2013. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2013.
Research area Bioquímica
Knowledge area Ciências biológicas
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=137870
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48863

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