Caracterização morfológica do intestino do robalo peva (centropomus parallelus) e avaliação do efeito do bacillus subtilis sobre mastócitos com grânulos eosinofílicos (mcs/egc) e células caliciformes intestinais

Caracterização morfológica do intestino do robalo peva (centropomus parallelus) e avaliação do efeito do bacillus subtilis sobre mastócitos com grânulos eosinofílicos (mcs/egc) e células caliciformes intestinais

Author Silva, Wemeson Ferreira da Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Simoes, Manuel de Jesus Simoes Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Biologia Estrutural e Funcional
Abstract Characterize anatomical and morphologically different sites and layers of the intestine of fat snook (Centropomus parallelus). Quantify mast cells containing eosinophilic granules (MCs/EGC) and goblet cells after study specimens being fed with probiotic Bacillus subtilis. Material and Methods: A total of 50 animals were used. The morphologic, histochemical and ultra-structural study was carried out on 23 individuals, the histochemical and immune-histochemical was performed on 12 animals and 15 specimens was used as controls for the number of MCs/EGC and goblet cells, and for any variation in number of them after the supplementation of probiotic at the doses of 5g and 10g per kg of regular fish treat. Histological sections for light microscopic study were 5?m thick, were stained with HE dye, toluidine blue (semithin sections of 1?m), Nilceu M. Castro trichrome staining method and silver staining. For histochemical analysis, staining methods comprised PAS, pH-2.5 and pH-0.5 Alcian blue (AB), pH-2.5 AB plus PAS. For MCs/EGC morphology study the methods used were ferric hematoxylin eosin, Congo red, pH-6 acridine orange and toluidine blue. The histochemical analysis was carried out on sections treated with PAS, pH-2.5 and pH-0.5 AB, pH-2.5 AB plus PAS. Antibodies anti-tryptase, chimase and serotonine were used for immunohistochemical study. Tissue fragments 0.5mm-sized, fixed in Karnovsky solution were conventionally processed for Transmission Electron Microscope imaging. MCs/EGC and goblet cells were quantified in one-square millimeter areas of serial sections from sites of the intestine of animals from all 3 study groups. Results: Anatomically, the intestine comprised pyloric caeca, proximal and distal intestine, and rectum. Morphologically, the layer comprised the mucosa, submucosa, muscular layer and serosa. The mucosa presented an epithelium containing absorptive cells (enterocytes), endocrine cells, intraepithelial limphocytes, rodlet cells, goblet cells positive for neutral glycoproteins, acidic carboxylated and sulfated glycosaminoglycans, lamina propria consisted of connective tissue, blood vessels, MCs / EGC, leukocytes and leukocyte infiltrate, and a muscular mucosa between the mucosa and the submucosa. Connective tissue, blood vessels and leucocytic infiltrate formed the submucosa. Their granules of MCs/EGC showed an acidic and basic character and were also metachromatic, presence of neutral glycoproteins, carboxylated and sulfated glycosaminoglycans and positive for tryptase, chymase and serotonine were finding. The muscular layer showed an inner circular and an outer longitudinal arrangement and it?s connective tissue contained nerve plexuses. The serosa was formed by a thin layer of connective tissue, containing vessels and the subserosa nerve plexus. Ultrastructurally, the mucosa showed enterocytes showing an euchromatic nucleus within a cytoplasm containing mitochondria and electrondense spherical granules, goblet cells showing euchromatic nucleus and cytoplasm plentiful of granules of varied size and electrondensity, four types of enteroendocrine cells, intraepithelial phagocytes, rodlet cells showing euchromatic nucleus and rod-shaped cytoplasmic granules of varying electron density and MCs/EGC with euchromatic nucleus and spherical cytoplasmic granules. The quantification of MCs/EGC showed statistically significant difference only for animals in the group 5-grams, which had an increased mean number of these cells when compared with that showed by the control group. Conclusions: The intestine of the fat snook has pyloric caeca, proximal and distal intestines and rectum. Its mucosa contains enterocytes, goblet cells and enteroendocrine cells, intraepithelial lymphocytes, rodlet cells, phagocytes and MCs/EGC. The granules of MCs/EGC had basic and acidic content as well as tryptase, chymase and serotonine. Ultra-structurally, four different types of endocrine cells were identified and the supplementation of probiotic increased the number of MCs/EGC in the intestinal mucosa and submucosa.

Caracterizar anatomica e morfologicamente as diferentes regiões e camadas do intestino do robalo peva (Centropomus parallelus). Quantificar os mastócitos com grânulos eosinofílicos (MCs/EGC) e células caliciformes do intestino após suplementação da ração com probiótico Bacillus subtilis. Material e métodos: Foram utilizados 50 animais, sendo 23 para o estudo anatômico, morfológico, histoquímico e ultraestrutural, 12 para o estudo histoquímico e imunohistoquímico de MCs/EGC, e 15 para o estudo quantitativo de MCs/EGC e células caliciformes de animais controle e após administração do probiótico nas dosagens de 5g e 10g por kg-1 de ração. Para a análise morfológica, foram realizados cortes de 5?m de todas as regiões, sendo as secções coradas com HE, coloração especial de tricrômio de NMC, impregnação argêntica e azul de toluidina em cortes semifinos de 1?m. Para histoquímica, foram empregados os métodos de PAS, Alcian Blue (AB) pH 2,5 e 0,5 e AB pH 2,5 + PAS. Para o estudo de MCs/EGC, foram aplicados os métodos de hematoxilina férrica ? eosina, vermelho Congo, alaranjado de acridina pH 6, azul de toluidina, PAS, AB pH 2,5 e 0,5, AB pH 2,5 + PAS e anticorpos anti-triptase, quimase e serotonina. Para a análise ultraestrutural, fragmentos de 0,5 mm das regiões foram fixados em Karnovsky e processados segundo o método convencional para MET. Os MCs/EGC e células caliciformes foram quantificados em todas as regiões intestinais dos grupos controle, 5g e 10g. Resultados: O intestino foi constituído por cecos pilóricos, intestino proximal, intestino distal, reto e pelas camadas mucosa, submucosa, muscular e serosa. A mucosa apresentou no epitélio células absortivas (enterócitos), endócrinas, linfócitos intraepiteliais, rodlet cells, células caliciformes positivas para glicoproteínas neutras e glicosaminoglicanas ácidas carboxiladas e sulfatadas, lâmina própria constituída de tecido conjuntivo, vasos sanguíneos, MCs/EGC, leucócitos e infiltrado leucocitário, e uma muscular da mucosa entre a mucosa e a submucosa. A submucosa foi constituída por tecido conjuntivo, vasos sanguíneos, infiltrado leucocitário e MCs/EGC contendo grânulos de caráter básico, ácido, metacromáticos e positivos para glicoproteinas neutras, glicosaminoglicanas carboxiladas e sulfatadas, triptase, quimase e serotonina. A muscular apresentou uma camada circular interna e uma longitudinal externa, e plexo nervoso mioentérico. A serosa foi formada por uma fina camada de tecido conjuntivo revestido pelo mesotélio, vasos e plexo nervoso subseroso. Ultraestruturalmente foram identificados enterócitos de núcleo eucromático e citoplasma contendo mitocôndrias e grânulos esféricos e eletrondensos, células caliciformes de núcleo eucromático e grânulos citoplasmáticos de tamanho e eletrondensidade variáveis, quatro diferentes tipos de células enteroendócrinas, fagócitos intraepiteliais, rodlet cells contendo grânulos citoplasmáticos em forma de haste e MCs/EGCs de núcleo com eletrondensidade variada e grânulos citoplasmáticos esféricos. A análise quantitativa demonstrou diferença estatística significante somente para MCs/EGC do grupo de 5g que tiveram número médio destas células aumentado quando comparado ao grupo controle. Conclusões: O intestino é composto por cecos pilóricos, intestinos proximal, distal e reto. Na mucosa estão presentes enterócitos, células caliciformes, células enteroendócrinas, linfócitos intraepiteliais, rodlet cells, fagócitos e MCs/EGC. Os grânulos dos MCs/EGC apresentam componentes básicos, ácidos, triptase, quimase e serotonina. Ultraestruturalmente foram identificados quatro tipos de células endócrinas. A adição do probiótico aumentou o número de MCs/EGC na mucosa e submucosa intestinal dos animais do grupo 5g.
Keywords morphology
immunohistochemistry
intestinal mucosa
mast cells
bacillus subtilis
sea bass
morfologia
imunohistoquímica
mucosa intestinal
mastócitos
bacillus subtilis
robalo
Language Portuguese
Date 2016-10-26
Published in SILVA, Wemeson Ferreira da. Caracterização morfológica do intestino do robalo peva (centropomus parallelus) e avaliação do efeito do bacillus subtilis sobre mastócitos com grânulos eosinofílicos (mcs/egc) e células caliciformes intestinais. 2016. 107 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.
Research area Biologia geral
Knowledge area Ciências biológicas
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 107 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4016638
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47308

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