Importância do co-cultivo com fibroblastos de camundongo 3T3 para estabelecer cultura de suspensão de células epiteliais do limbo humano

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dc.contributor.author Cristovam, Priscila Cardoso [UNIFESP]
dc.contributor.author Glória, Maria Aparecida da [UNIFESP]
dc.contributor.author Melo, Gustavo Barreto de [UNIFESP]
dc.contributor.author Gomes, José Álvaro Pereira [UNIFESP]
dc.date.accessioned 2015-06-14T13:38:44Z
dc.date.available 2015-06-14T13:38:44Z
dc.date.issued 2008-10-01
dc.identifier http://dx.doi.org/10.1590/S0004-27492008000500015
dc.identifier.citation Arquivos Brasileiros de Oftalmologia. Conselho Brasileiro de Oftalmologia, v. 71, n. 5, p. 689-694, 2008.
dc.identifier.issn 0004-2749
dc.identifier.uri http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/4570
dc.description.abstract PURPOSE: To evaluate the importance of the presence of 3T3 fibroblasts for establishing limbal epithelial cultures from cell suspension obtained from corneo-scleral rims (CSR). METHODS: Corneo-scleral rims from different donors (n=6) had their posterior stroma and endothelium stripped away. Each corneo-scleral rim was divided into three equal segments that were set up in tissue culture in three different conditions: one of the segments was placed with the epithelial side up on the bottom of a 6-well culture plate (Group A). The other two fragments were trypsinized and the obtained cell suspension was cultured with (Group B) or without (Group C) irradiaded 3T3 cells. The cells were cultured in supplemental hormonal epithelial medium (SHEM), the epithelial migration and clone formation in groups A, B and C were evaluated with phase contrast microscopy and rodamine B staining. RESULTS: Epithelial cell growth was observed in 4/6 rims (Group A). All epithelial cell suspensions that were cultured with 3T3 cells (Group B) formed clones. No adhesion or true clone formation (holo- or meroclones) was observed in the cell suspensions that were cultivated without 3T3 (Group C) (p=0.009). CONCLUSIONS: Epithelial cell suspension obtained from corneo-scleral rims in this model needs to be cultivated with 3T3 cells in order to form clones and establish limbal epithelial cell colonies with the potential to be used for ocular surface reconstruction. en
dc.description.abstract OBJETIVO: Avaliar a importância da presença de células 3T3 para estabelecer cultura de suspensão de células epiteliais do limbo obtido de rimas córneo-esclerais. MÉTODOS: Rimas de diferentes doadores tiveram seus estroma posterior e endotélio removidos (n=6). Cada rima foi dividida em três segmentos iguais, que foram colocados em cultura em três diferentes condições: um segmento foi colocado na placa de cultura com o lado epitelial para cima (Grupo A). Os dois segmentos restantes foram tripsinizados e a suspensão de células obtida foi cultivada com (Grupo B) ou sem (Grupo C) células 3T3 irradiadas. As células foram mantidas em meio de cultura supplemental hormonal epithelial médium (SHEM), a migração epitelial e a formação de clones nos grupos A, B e C foram avaliadas pela microscopia de contraste de fase e por coloração pela rodamina B. Os resultados foram comparados estatisticamente. RESULTADOS: O crescimento de células epiteliais foi observado em 4/6 rimas (Grupo A). Todas as suspensões de células epiteliais que foram cultivadas com células 3T3 (Grupo B) formaram clones. Nenhuma adesão ou formação de clones verdadeiros (holo ou meroclones) foi observada na cultura de células que foi cultivada sem 3T3 (Grupo C) (p=0,009). CONCLUSÕES: Suspensão de células epiteliais límbicas obtidas de rimas córneo-esclerais no modelo utilizado precisa ser cultivada com células 3T3 para formar clones e estabelecer colônias epiteliais com perspectivas para uso terapêutico na reconstrução da superfície ocular. pt
dc.format.extent 689-694
dc.language.iso por
dc.publisher Conselho Brasileiro de Oftalmologia
dc.relation.ispartof Arquivos Brasileiros de Oftalmologia
dc.rights Acesso aberto
dc.subject Epithelial cells en
dc.subject Cell culture techniques en
dc.subject Cell differentiation en
dc.subject Stem cells en
dc.subject Limbus corneae en
dc.subject Células epiteliais pt
dc.subject Técnicas de cultura de células pt
dc.subject Diferenciação celular pt
dc.subject Células-tronco pt
dc.subject Limbo da córnea pt
dc.title Importância do co-cultivo com fibroblastos de camundongo 3T3 para estabelecer cultura de suspensão de células epiteliais do limbo humano pt
dc.title.alternative Importance of 3T3 feeder layer to establish epithelial cultures from cell suspension obtained from corneo-scleral rims en
dc.type Artigo
dc.contributor.institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.description.affiliation Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) - UNIFESP Centro Avançado de Superfície Ocular (CASO) Instituto da Visão
dc.description.affiliation UNIFESP Departamento de Oftalmologia
dc.description.affiliationUnifesp UNIFESP, Centro Avançado de Superfície Ocular (CASO) Instituto da Visão
dc.description.affiliationUnifesp UNIFESP, Depto. de Oftalmologia
dc.identifier.file S0004-27492008000500015.pdf
dc.identifier.scielo S0004-27492008000500015
dc.identifier.doi 10.1590/S0004-27492008000500015
dc.description.source SciELO



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Name: S0004-27492008000500015.pdf
Size: 1.151Mb
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