Alteração da expressão gênica das vias de sinalização TGFβ/BMP, matriz extracelular e moléculas de adesão decorrente da passagem celular em cultura primária de hDPSC.

Alteração da expressão gênica das vias de sinalização TGFβ/BMP, matriz extracelular e moléculas de adesão decorrente da passagem celular em cultura primária de hDPSC.

Alternative title Alteration of gene expression of signaling TGFβ / BMP pathways, extracellular matrix and adhesion molecules due to cell passage in hDPSC primary culture.
Author Penna, Vanessa Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Duailibi, Silvio Eduardo Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Cirurgia translacional - São Paulo
Abstract Introdução: A Engenharia Tecidual (ET) tem como objetivo a fabricação de órgãos e tecidos. Preconiza-se o uso de células autólogas para evitar a incompatibilidade imunológica, porém, pela escassez do número de células obtidas na fonte celular, muitas passagens se tornam necessárias para atingir um número adequado de células. As culturas primárias freqüentemente sofrem diferenciação indesejada, modificando o comportamento e o destino celular. O uso de enzimas proteolíticas durante as passagens celulares é potencialmente lesivo à fisiologia celular, todavia pouca relevância tem sido dada a este aspecto na ET. Essas enzimas, ao digerir a matriz extracelular (MEC), também alteram proteínas de superfície (PS), interferindo na interação célula-célula (ICC). Consequentemente podem alterar a sinalização celular, a expressão gênica, o comportamento e o destino. Objetivo: Avaliar a expressão gênica na via de sinalização TGFβ/BMP, em matriz extracelular e em moléculas de adesão, das células tronco mesenquimais de polpa dental humana (hDPSC) obtidas diretamente do tecido e sob cultura primária até a terceira passagem. Métodos: Foi analisada a expressão gênica por qRT-PCR array da via de sinalização TGFβ/BMP, matriz extracelular e moléculas de adesão após três passagens celulares na cultura primária de hDPSC. Resultados: Os genes COL16A1(p=0,045), TIMP1(p=0,003), THBS1(p=0,027), TGFBI(p=0,001), ITGA8(p=0,002), FN1(p=0,035), CD44(p=0,046),TSC22D1(p=0,026) e RPL13A(p=0,017) tiveram sua expressão aumentada e os genes NCAM1(p=0,047), BGLAP(p=0,037) e ID1(p=0,027) tiveram sua expressão diminuída em relação às células de tecido de origem. Conclusão: Houve alteração da expressão gênica na cultura celular de hDPSC após três passagens. Porém, um gene solitariamente pode não exercer função chave na diferenciação de células, influenciada pela relação com a MEC e com o ambiente extracelular. O controle por modulação da diferenciação celular representa um aspecto importante no desenvolvimento da ET.

Introduction: Tissue Engineering (TE) aims to manufacture organs and tissues and advocates the use of autologous cells to avoid immune incompatibility. However, a longer culture time is necessary to achieve that purpose. Primary cultures often suffer undesirable differentiation, modifying behavior and cell fate. The use of proteolytic enzymes during cell passages is potentially harmful to cell physiology, but little importance has been given to this aspect in ET. These enzymes which digest the extracellular matrix (ECM) also alter surface proteins (SP) and interfere with cell-cell interactions (ICC). Consequently, may alter cell signaling by modifying gene expression, behavior and cell fate. Objective: To assess gene expression in the signaling TGFβ / BMP pathway, in extracellular matrix and in adhesion molecules, of mesenchymal human dental pulp cells from tissue and cultured until third passage. Methods: We had evaluated gene expression by qRT-PCR array of signaling TGFβ / BMP pathway, in extracellular matrix and in adhesion molecules, of mesenchymal cells from primary and third passage cultured human dental pulp Results: COL16A1(p=0,045), TIMP1(p=0,003), THBS1(p=0,027), TGFBI(p=0,001), ITGA8(p=0,002), FN1(p=0,035), CD44(p=0,046),TSC22D1(p=0,026) and RPL13A(p=0,017) genes had their expression increased and NCAM1(p=0,047), BGLAP(p=0,037) and ID1(p=0,027) genes had reduced expression compared to primary cells. Conclusion: There were modifications in gene expression after three passages. However, a single gene could not be enough to exert a key role in cell differentiation that is broadly affected by its relationship with the ECM and extracellular environment. The control by modulation of cellular differentiation, is an important aspect in the development of ET.
Keywords Matriz extracelular
Cultura celular primária
Engenharia Tecidual
Fator de crescimento transformador beta
Proteína morfogenética óssea
Interação célula-célula
Extracelular Matrix
Primary Cell Culture
Tissue Engineering
Transforming Growth Factor beta
Bone Morfogenetic Protein
Cell-Cell Interaction
Language Portuguese
Sponsor Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Grant number FAPESP: 2013/00288-4
Date 2014
Published in PENNA, Vanessa. Alteração da expressão gênica das vias de sinalização TGFβ/BMP, matriz extracelular e moléculas de adesão decorrente da passagem celular em cultura primária de hDPSC. 2014. 131 f. DC CITATION. Dissertação (Mestrado em Ciências) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2014.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 131 f.
Access rights Open access Open Access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/39274

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