Detecção do Paracoccidioides brasiliensis por técnica de PCR em biópsias de pacientes com paracoccidioidomicose

Detecção do Paracoccidioides brasiliensis por técnica de PCR em biópsias de pacientes com paracoccidioidomicose

Alternative title Detection by PCR of Paracoccidioides brasiliensis in lesions from patients with paracoccidioidomycosis: correlation with the histopathology features
Author Ricci, Giannina Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Franco, Marcello Fabiano de Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract A Paracoccidioidomicose (PCM) e micose sistemica profunda cujo agente etiologico e um fungo termodimorfico, Paracoccidioides brasifensis. E doenca grave, por vezes fatal, de diagnostico precoce dificil e que pode permanecer latente por ate 40 anos. O objetivo foi desenvolver metodo biomolecular em biopsias emblocadas em parafina para a deteccao do P. brasifensis por tecnica de PCR utilizando primers baseados no gene da gp43 e confrontar os resultados com parametros morfologicos da lesao: padrao do granuloma (compacto ou frouxo), quantidade e viabilidade dos fungos. Foram estudadas 107 biopsias fixadas em formalina 10 por cento e incluidas em parafina (tegumento, linfonodo, pulmao, lingua). A avaliacao histopatologica foi realizada em laminas coradas pela HE e Grocott. No estudo molecular, utilizou-se a tecnica de PEP/Nested/PCR, apos extracao do DNA, As reacoes de PCR demonstraram presenca de DNA do P. brasiliensis em 29,9 por cento das amostras. Observou-se que as amostras que continham maior quantidade de fungos, com aspecto viavel, tiveram resultado de PCR positiva. Mas ainda, o teste Qui-Quadrado indicou que houve associacao entre quantidade e viabilidade dos fungos e PCR. Verificou-se que 39,3 por cento dos granulomas eram do tipo compacto e 60,7 por cento, do tipo frouxo. O Teste QuiQuadrado revelou que nao houve associacao entre o tipo de granuloma e a positividade da PCR. O sequenciamento automatizado de DNA dos fragmentos de PCR revelou diferenca na sequencia genica entre os fungos de granuloma. Os resultados devem ser considerados no contexto: a) as amostras foram fixadas em formalina 10 por cento, sem controle de pH; b) foram utilizados primers baseados no gene da gp43, cujo polimorfismo pode ter impedido a amplificacao de algumas amostras. Como resultado preliminar, ressalta-se que a tecnica de sequenciamento revelou diferenca entre os fungos causadores dos dois tipos de granuloma. Finalmente, concluiu-se que a quantidade e a viabilidade dos fungos presentes nas amostras influenciam o resultado final na PCR
Keywords Micologia
Biologia molecular
Language Portuguese
Date 2003
Published in São Paulo: [s.n.], 2003. 84 p.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 84 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/19692

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