Determinação da sequência primária do inibidor glicosilado das sementes de Bauhinia rufa

Determinação da sequência primária do inibidor glicosilado das sementes de Bauhinia rufa

Alternative title Primary sequence determination of the glycosilated inhibitor isolated from Bauhinia rufa seeds
Author Sumikawa, Joana Tomomi Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Oliva, Maria Luiza Vilela Autor UNIFESP Google Scholar
Abstract Objetivo principal: Isolar e caracterizar a glicoproteina que apresenta atividade inibitoria de elastase detectada no extrato das sementes de Bauhinia rufa. Metodos: O inibidor foi purificado por precipitacao por acetona (80 por cento v/v), cromatografia de afinidade Con A Sepharose, cromatografia de troca ionica (HiTrap Q e ResourceTM Q em sistema FPLC), cromatografia de filtracao em gel SuperdexTm 200 (sistema FPLC) e cromatografia de fase reversa em coluna C1$ (sistema HPLC). gBrEl foi analisado por SDS PAGE para analise da massa molecular e deteccao de carboidratos. Resultados: pela analise eletroforetica o inibidor com atividade anti elastasica apresentou-se como uma cadeia unica com uma massa molecular aproximadamente de 20 kDa e pela coloracao com reagente de Schiff confirmou a presenca de carboidratos na estrutura da proteina. gBrEl inibe elastase pancreatica de porco e nao inibe elastase de neutrofilo humana, calicreina plasmatica humana, calicreina pancreatica de porco e tripsina. Atraves da analise por sequenciamento, a proteina e composta por 143 residuos de aminoacidos e o sitio de glicosilacao foi detectado em Asn 38 apresenta Mr. 1170 por espectrometria de massa. Discussao: A metedologia empregada para a purificacao do inibidor de elastase obteve rendimento de 21 e purificacao de cerca de 306 vezes. A constante de inibicao da elastase e de 6,18.10-8 M e a estequiometria de reacao e 1:2. Atraves da analise de similariedade (FASTA program) gBrEl apresenta-se muito similar aos inibidores da familia Kunitz de plantas e pela comparacao conservativa do sitio reativo, o...(au)
Keywords Endopeptidases
Inibidores de Proteases
Endopeptidases
Protease Inhibitors
Language Portuguese
Date 2003
Published in São Paulo: [s.n.], 2003. 114 p.
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 114 p.
Access rights Closed access
Type Dissertation
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18493

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